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薄層色譜TLC實(shí)驗(yàn)中紫外線燈怎么操作?

時(shí)間:2022-11-14 瀏覽次數(shù):1590

信息摘要:

在進(jìn)行薄層色譜TLC實(shí)驗(yàn)時(shí),操作紫外線燈時(shí)要佩戴好紫外線防護(hù)面罩,因?yàn)槟鉚LC試驗(yàn)用的都是雙波長(zhǎng)紫外線燈,短波對(duì)皮膚很眼睛傷害特大,長(zhǎng)波對(duì)眼睛傷害很大,不做防護(hù)臉部皮膚會(huì)起泡和紅腫,眼睛會(huì)造成玻璃體混濁,視力下降。

在進(jìn)行薄層色譜TLC實(shí)驗(yàn)時(shí),操作紫外線燈時(shí)要佩戴好LUV-40紫外線防護(hù)面罩,因?yàn)槟鉚LC試驗(yàn)用的都是雙波長(zhǎng)紫外線燈,短波對(duì)皮膚很眼睛傷害特大,長(zhǎng)波對(duì)眼睛傷害很大,不做防護(hù)臉部皮膚會(huì)起泡和紅腫,眼睛會(huì)造成玻璃體混濁,視力下降。

先將LEAC-280L紫外線燈電源插上,選擇打開需要照射的波長(zhǎng)開關(guān),把跑膠板放在紫外線燈下面照射即可。如果有LCM-26紫外線觀察箱,在紫外線觀察箱里面觀察效果會(huì)更好。

薄層色譜(TLC)實(shí)驗(yàn)步驟:

1、切割薄板。通常,買來的硅膠板都是方形的玻璃板,必需用鉆石頭玻璃刀按照模板的形狀進(jìn)行切割。在切割玻璃之前,用尺子和鉛筆在薄板的硅膠面上輕輕地標(biāo)出基線的位置(注意不要損壞硅膠面)。借助鋒利的玻璃切割刀和一把引導(dǎo)尺,你便可方便地進(jìn)行玻璃切割。當(dāng)整塊玻璃被切割后,你就可以進(jìn)一步將其分成若干獨(dú)立的小塊了。(開始的時(shí)候,也許你會(huì)感到有一些難度,但經(jīng)過一些訓(xùn)練以后,你便會(huì)熟練地掌握該項(xiàng)技術(shù)。)

2、選取合適的溶劑體系。化合物在薄板上移動(dòng)距離的多少取決于所選取的溶劑不同。在戊烷和己烷等非極性溶劑中,大多數(shù)極性物質(zhì)不會(huì)移動(dòng),但是非極性化合物會(huì)在薄板上移動(dòng)一定距離。相反,極性溶劑通常會(huì)將非極性的化合物推到溶劑的前段而將極性化合物推離基線。一個(gè)好的溶劑體系應(yīng)該使混合物中的化合物都離開基線,但并不使化合物都到達(dá)溶劑前端,Rf值好在0.15~0.85之間。雖然這個(gè)條件不一定都能滿足,但這應(yīng)該作為薄層色譜分析的目標(biāo)(在柱色譜中,合適的溶劑應(yīng)該滿足Rf在0.2~0.3之間)。那么,應(yīng)該選取哪些溶劑呢?一些標(biāo)準(zhǔn)溶劑和他們的相對(duì)極性列于如下:

強(qiáng)極性溶劑:

甲醇>乙醇>異丙醇

中等極性溶劑:

乙腈>乙酸乙酯>氯仿>二氯甲烷>乙MI>甲苯

非極性溶劑:

環(huán)己烷,石油醚,己烷,戊烷

常用混合溶劑:

乙酸乙酯/己烷:常用濃度0~30%。但有時(shí)較難在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。

乙MI/戊烷體系:濃度為0~40%的比較常用。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上非常容易除去。

乙醇/己烷或戊烷:對(duì)強(qiáng)極性化合物5~30%比較合適。

二氯甲烷/己烷或戊烷:5~30%,當(dāng)其他混合溶劑失敗時(shí)可以考慮使用。

3、將1~2mL選定的溶劑體系倒入展開池中,在展開池中放置一大塊濾紙。

4、將化合物在標(biāo)記過的基線處進(jìn)行點(diǎn)樣。我們用的毛細(xì)管是買來的,此外,毛細(xì)管也可從加熱過的Pasteur吸管上拔下。在跟蹤反應(yīng)進(jìn)行時(shí),一定要點(diǎn)上起始反應(yīng)物、反應(yīng)混合物以及兩者的混合物。

5、展開:讓溶劑向上展開約90%的薄板長(zhǎng)度。

6、從展開池中取出薄板并且馬上用鉛筆標(biāo)注出溶劑到達(dá)的前沿位置。根據(jù)這個(gè)計(jì)算Rf的數(shù)值。

7、讓薄板上的溶劑揮發(fā)掉。

8、用非破壞性技術(shù)觀察薄板。好的非破壞性方法就是用紫外燈進(jìn)行觀察。將薄板放在紫外燈下,用鉛筆標(biāo)出有紫外活性的點(diǎn)。盡管在5.301中不用這種方法,但我們將采用另一常用的無損方法——用碘染色法。

9、用破壞性方式觀測(cè)薄板。當(dāng)化合物沒有紫外活性的時(shí)候,只能采用這種方法。在各種TLC顯色劑的調(diào)配方法中,提供了很多非常有用的染色劑。使用染色劑時(shí),將干燥的薄板用鑷子夾起并放入染色劑中,確保從基線到溶劑前沿都被浸沒。用紙巾擦干薄板的背面。將薄板放在加熱板上觀察斑點(diǎn)的變化。在斑點(diǎn)變得可見而且背景顏色未能遮蓋住斑點(diǎn)之前,將薄板從加熱板上取下。

10、根據(jù)初始薄層色譜結(jié)果修改溶劑體系的選擇。如果想讓Rf變得更大一些,可使溶劑體系極性更強(qiáng)些;如果想讓Rf變小,就應(yīng)該使溶劑體系的極性減小些。如果在薄板上點(diǎn)樣變成了條紋狀而不是一個(gè)圓圈狀,那么你的樣品濃度可能太高了。稀釋樣品后再進(jìn)行一次薄板層析,如果還是不能奏效,就應(yīng)該考慮換一種溶劑體系。

11、做好TLC標(biāo)記,計(jì)算每個(gè)斑點(diǎn)的Rf值,并且在筆記本中畫出圖樣。


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